시료준비와 단백질 정량 & 단백질 전기영동, gel staing, 면역발색법 실험 레포트 다운받기

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시료준비와 단백질 정량 & 단백질 전기영동, gel staing, 면역발색법 실험 레포트

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실험3. 시료준비와 단백질정량

실험목적
완충용액의 특성을 이해하고, 세포의 파쇄방법을 익힌다.
단백질 정량 방법과 원리를 이해하고, bradford법을 이용하여 단백질농도를 계산하고 전기영동용 시료를 준비한다.

결과 및 토의/Results and discussion
BSA 표준 단백질의 흡광도 측정 결과

1 ㎍
2 ㎍
3 ㎍
4 ㎍
5 ㎍
1차
0.102
0.219
0.246
0.378
0.430
2차
0.103
0.185
0.272
0.340
0.394
평균
0.1025
0.202
0.259
0.359
0.412

BSA 표준 단백질의 흡광도-단백질 농도 그래프
흡광도의 평균값을 X축, 단백질 양을 Y축으로 하여 측정값을 표시하고 추세선의 2차 방정식(Y 〓 a + b1X + b2 X2)을 구하여 a값, b1값, b2값과 R2 표시하세요.
2차 방정식 : 0.9956 R2:

시료의 흡광도 측정 결과
근원세포
근관
1차
0.082
0.030
2차
0.106
0.022
평균
0.094
0.026

시료의 측정된 흡광도를 이용하여 다음을 계산한다.

시료
흡광도
시료의 농도
X ㎍ 시료
완충용액
4X Sample buffer
근원세포
0.094
0.4534
(15㎍)33.0833
6
13
근관
0.026
0.1181
(4㎍)33.8696
5
13

실험을 통하여 얻은 결과를 설명하시오
. 단백질의 농도를 측정하기 위해서 일단 BSA를 기준 단백질로 사용하여 실험하였는데, 먼저 BSA를 증류수에 양이1,2,3,4,5 ㎍ 이 되도록 용해시켜서 Bradford 법을 이용하여 각 흡광도를 측정해 보았다. 오차가 발생할수 있을 경우를 생각해서 1차,2차에 나눠서 2번 실험을 반복하여서 그 평균값으로 흡광도를 결정했다. 그래프에서 얻어진 이차방정식은 y〓7.2256x²+8.9926x-0.0023 이고 R2은 0.9956이 나왔다. R2은 1에 가까울수록 Linear한 값인데 약간은 오차가 있는 값이라는 것을 알 수 있다. 이것은 실험진행 중에 BSA가 덜 들어가는 등의 원인으로 오차가 발생했을 것이라 추측할 수 있다.
다음 BSA로 구한 흡광도를 이용하여 근원세포와 근관의 농도를 구하였는데, BSA흡광도 그래프에서 얻은 2차식의 x값에 근원세포와 근관의 평균흡광도를 넣고 구한 값에 나누기2 해주면 농도를 얻을 수 있게 된다. 얻은 결과 근원세포의 농도는 0.4534 이고 근관은 0.1181가 나왔다.
그 다음으로 각 세포별로 2개씩 전기영동용 시료를 만들었다. 이때 단백질이 원래는 20 ㎍ 이 되게 만들어야 했지만 우리 조의 근원세포와 근관세포의 시료의 농도가 충분치 않아서 근원세포는 15㎍, 근관세포는 4㎍으로 맞추었다. 그 용량은 15 또는 4/농도 로 구한다. 4× 버퍼를 1× 로 만들어 주기 위해서 39㎕로 기준을 잡아놓고, 근원세포에 완충용액 6㎕를 넣고 근관에는 5㎕을 넣어서 부피를 맞춰준후 4× 를 각각 13㎕씩 넣어주면 전기영동용 시료가 완성된다.
실험4. 단백질 전기영동과 Gel staining, 면역발색법
[ 단백질 전기영동과 gel staining ]
실험목적
단백질 전기영동의 원리를 이해한다.
근원세포와 근관세포의 단백질 전기영동을 통해 근원세포의 분화과정에서 단백질 발현의 변화를 알아본다.
결과 및 토의 / Results and discussions
전기영동결과 (사진 첨부)

Excel 또는 기타 프로그램을 이용하여 standard marker의 크기와 이동거리를 이용하여 표준곡선(standard curve)을 그리고 추세선의 공식을 찾으시오
크기 (Da)
240000
140000
100000
70000
50000
35000
Log10 (크기)
5.380211
5.146128
5
4.845098
4.69897
4.544068
이동거리 (mm)
5
8
13


자료출처 : http://www.ALLReport.co.kr/search/Detail.asp?pk=17031792&sid=sanghyun7776&key=



[문서정보]

문서분량 : 8 Page
파일종류 : DOCX 파일
자료제목 : 시료준비와 단백질 정량 & 단백질 전기영동, gel staing, 면역발색법 실험 레포트
파일이름 : 시료준비와 단백질 정량 & 단백질 전기영동, gel staing, 면역발색법 실험 레포트.docx
키워드 : 시료준비와,단백질,정량,&,전기영동,gel,staing,면역발색법,실험,레포트
자료No(pk) : 17031792